Pedro Acosta berhasil menyalip Marco Bezzecchi dalam sesi latihan Practice di Grand Prix Valencia, menandai awal yang penting meskipun hanya dengan selisih waktu seperseribu detik. Sesi latihan dimulai dengan tenang, tetapi tidak butuh waktu lama bagi keduanya untuk berada di trek bersama. Saat itu, pembalap Aprilia memimpin dan pembalap Spanyol mengikuti di belakangnya, mereka saling bertukar posisi. Namun, kesalahan kecil yang dilakukan oleh Marco membuatnya jatuh, sementara Pedro terus melaju dengan stabil selama 10 putaran pertama.
Menuju akhir sesi, dengan 16 menit tersisa, Acosta menggunakan ban belakang lunak baru dan mencatatkan waktu lap spektakuler 1:29,240 yang tidak bisa dikejar oleh siapapun, termasuk Bezzecchi yang mencatatkan waktu 1:29,476 dan terbaiknya 1:29,293 di lap terakhir tak cukup untuk mengalahkan Pedro. Franco Morbidelli menempati posisi ketiga, tampil solid sepanjang sesi dengan kecepatan tinggi di atas GP24 milik Ducati. Alex Marquez menguji paket aerodinamis GP25, yang diambil alih dari tim resmi Italia, sementara Ai Ogura berada di peringkat kelima di depan Jack Miller yang menjadi pembalap tercepat di sesi latihan pagi.
Di posisi ketujuh ada Fabio Di Giannantonio, sementara Fermin Aldeguer yang terjatuh di FP1 menempati posisi kedelapan. Joan Mir dan Fabio Quartararo juga berhasil masuk ke Q2 dan melengkapi 10 besar. Meskipun Quartararo mengalami kebocoran bahan bakar, ia berhasil kembali ke pit dan menghasilkan waktu yang bagus.
Pembalap lain seperti Brad Binder, Raul Fernandez, dan Aleix Espargaro tidak lolos ke Q2, sementara Maverick Viñales berada di urutan ke-18, di depan Enea Bastianini dan Jorge Martín di posisi ke-22 meskipun tidak menggunakan ban baru. Nicolò Bulega, pengganti Marc Márquez di tim resmi Ducati, menutup catatan waktu. Pokoknya, Practice MotoGP Valencia berlangsung atas keberhasilan Pedro Acosta dalam meraih kemenangan saat menghadapi Marco Bezzecchi, yang menjadi perhatian utama dalam sesi latihan tersebut.
